技术领域

本发明属于动物饲料领域，具体涉及一种公猪饲料及其制备方法。

背景技术

据统计，世界上经产母猪年平均窝产仔数21～23头，而我国的经产母猪年平均窝产仔数在17头以下，远低于世界平均水平。公猪繁殖性能的高低直接影响后代的数量、质量以及猪场的经济效益，营养是影响其公猪繁殖潜力的主要因素之一。尽管市场上也有种公猪饲料售卖，但是大多数种公猪饲料容易造成公猪增膘快，性成熟晚，性欲不强，睾丸功能异常，导致不能正常产生精子，最终造成公猪繁殖性能减退和健康状况下降。目前在公猪营养方而的研究较少，这与生产者对公猪营养的重视程度不够及成本高、单一猪场饲养种猪品种有限等原因造成。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种公猪饲料，目的在于延长种公猪的利用年限，提高精液质量，最大限度地减少因淘汰种公猪而造成的经济损失。

本发明提供的公猪饲料，其含有如下重量份的组分：玉米500-700份，豆粕150-200份，鱼粉30-55份，小麦胚芽40-60份，膨化大豆20-40份，磷酸氢钙10-15份，石粉8-15份，食盐2-8份，50％氯化胆碱1-2份，微生态制剂0.1-0.3份，赖氨酸0.5-1份，蛋氨酸0.2-0.5份、苏氨酸0.5-1份、公猪预混料0.5-1份，所述公猪预混料每公斤含有:维生素A 3500-12000IU，维生素D 750-4500IU，维生素E 20-100IU，铜4-35毫克，铁50-250毫克，锌40-150毫克，锰16-80 毫克，左旋肉碱0.2-0.8克，欧米伽3鱼油5-15克，酵母硒0.1-0.3克，中链脂肪酸MCT0.5-2克。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的公猪饲料含有如下重量份的组分：玉米650份、豆粕180份、鱼粉50份、小麦胚芽50份、膨化大豆30份、磷酸氢钙14份、石粉10份、食盐5份、50％氯化胆碱1.5份、微生态制剂0.2份、公猪预混料0.8份，所述公猪预混料每公斤含量:维生素A 3500-12000IU，维生素D750-4500IU，维生素E 20-100IU，铜4-35毫克，铁50-250毫克，锌40-150毫克，锰16-80毫克。肉碱0.4克，欧米伽3鱼油10克，酵母硒0.15克，中链脂肪酸MCT 1克。

其中，所述的微生态制剂包括嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)菌粉、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌粉以及植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)菌粉。

其中，所述的嗜酸乳杆菌优选为嗜酸乳杆菌CGMCC No.6499，所述的枯草芽孢杆菌优选为枯草芽孢杆菌CGMCC No.11261，所述的植物乳杆菌优选为植物乳杆菌CGMCCNo.11262。

本发明中的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)为申请人从猪粪便中分离得到，生物学特征如下：杆菌，为革兰氏阳性无芽孢杆菌，一般形成链杆状或球杆状，两端圆，0.6-0.9×1.5-6μm，以单个、成双或短链出现；不运动，无鞭毛，无分支，菌落较小，微微隆起，不规则，乳白色，光滑，有光泽，挑起托丝粘稠，无特有色素，用放大镜观察，深层显示在显微镜下观察，深层显示缠绕，或微绒毛丝状物，从菌堆的中心放射伸出。是微需氧菌，无氧或较低的氧分压环境下在固态基质表面生长，5％-10％的二氧化碳可促进嗜酸乳杆菌的增殖。可同化苦杏仁苷、纤维二糖、七叶苷、果糖、麦芽糖、半乳糖、乳糖、蔗糖、甘露糖、蜜二糖、棉籽糖、海藻糖，不能同化阿拉伯糖、葡萄糖酸盐、甘露糖。同型发酵，产生DL-乳酸。20℃下不生长，最 适生长温度为35℃-38℃，生长初始pH值为5.0-7.0，最适生长pH值为5.5-6.0。

本发明的嗜酸乳杆菌的有益效果在于：

(1)耐酸性强，能在其他乳酸菌不能生长的环境中生长，定植能力强，即大量活菌可以顺利进入肠道发挥益生功能。

(2)能分泌抗生物素类物质(嗜酸乳菌素、嗜酸杆菌素、乳酸菌素)，对肠道致病菌产生拮抗作用。

(3)产酸能力强，在肠道内可产生乳酸和醋酸，一方面有利于有效抑制动物肠道常见致病菌大肠杆菌K88，K99和金黄色葡萄球菌；另一方面能提高钙、磷、铁的利用率，促进铁和维生素D的吸收。

(4)可产生维生素K和维生素B，为动物机体补充维生素；还能够分泌蛋白酶，促进蛋白质的消化吸收，充分满足仔猪的营养需要，增强了机体抗应激和抗疾病能力，提高了日增重，从而降低生产成本。

本发明的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)申请人已于2012年9月4日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.6499。

本发明的枯草芽孢杆菌从仔猪粪便中分离经过初筛复筛得到，在LB培养基上菌落形态为菌落乳白色，圆形，湿润，表面光滑，边缘不整齐，不透明。菌体杆状，单个或成短链排列存在，革兰氏染色阳性菌株，产芽孢。

利用细菌通用引物对筛选出的菌株进行16s rDNA PCR扩增后鉴定，经NCBI序列比对结果相似性最高(100％)的是枯草芽孢杆菌，故分子鉴定DZS11为枯草芽孢杆菌。

将该菌株命名为枯草芽孢杆菌DZS11(Bacillus subtilis DZS11)，于2015年8月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生 物中心，简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为：CGMCC No.11261。

本发明的植物乳杆菌从仔猪粪便中分离经过初筛复筛得到，在MRS培养基上的菌落形态为菌落淡白色，圆形，湿润，液滴状，凸起，表面光滑，有光泽，边缘整齐，不透明。菌体杆状，单个或呈短链排列存在，革兰氏染色阳性菌株，无芽孢。初步鉴定为植物乳杆菌。

利用细菌通用引物对筛选出的菌株进行16s rDNA PCR扩增后鉴定，经NCBI序列比对结果相似性最高(100％)的是植物乳杆菌，故分子鉴定DZS12为植物乳杆菌。

将该菌株命名为植物乳杆菌DZS12(Lactobacillus plantarum DZS12)，于2015年8月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为：CGMCC No.11262。

微量元素硒在动物生长发育和代谢过程中发挥着重要的生物学功能，尤其在抗应激、促进生长发育、促进动物繁殖能力、改善免疫力和肉品质等方面具有重要的作用，此外，还可以通过参与合成硒蛋白和含硒酶而具有重要的抗氧化作用。与无机硒相比，以酵母硒为代表的有机硒不仅可有效地提高猪的饲料转化率、成活率、繁殖性能和猪肉中的硒含量以及改善猪肉品质，而且还能提高吸收利用率、降低环境污染。酵母硒中的硒被公猪高效利用，通过影响雄激素的分泌，参与抗氧化酶和精子的组成，调控精子发生和成熟过程，从而最终改善精液品质。

左旋肉碱能促进维生素、氨基酸等在体内有效的吸收转化，从而提高公猪每次射精量，提高精子顶体完整性，降低畸形率，提高精子活力和直线运动精子比例，保持健康和延长公猪生殖期，提高母猪受胎率。

公猪精子里面的脂肪含量有32.9％是欧米伽3，所以在欧米伽3 减少的情况下，很显然公猪精子的质量是下降的。而鱼油是欧米伽3脂肪酸的重要来源，添加适量的鱼油，可以提高精子的活力，降低精子的畸形率，提高了有效的精子数和具有完整顶体的精子数，有效改善精液的品质。

中链脂肪酸MCT具有特殊的生理特点，它和长链脂肪酸的吸收机制不同，不依赖肉碱的穿梭限制，3-4分钟就能吸收供能。能有效减少应激，同时还有抗菌和抗病毒的作用，能迅速补充能量，保持公猪旺盛的精力。

公猪料里面不能添加抗生素，因为抗生素会对精液品质产生负面影响，所以本产品特意添加了微生态。它能促进肠道健康，增强公猪的免疫力，提高精液品质。

本发明公猪饲料中添加了VE，有机硒，左旋肉碱和欧米伽3鱼油，中链脂肪酸MCT，并配合使用本发明的微生态，提高了种公猪精子密度和总精子数，提高了精子的活力，显著降低了种公猪的精子畸形率，大大改善了公猪的繁殖性能。

附图说明

图1饲料对种公猪精子密度的影响。Landrace：长白；Yorkshire：大白；Duroc：杜洛克；Segher：斯格。

图2不同饲料对种公猪总精子数的影响。Landrace：长白；Yorkshire：大白；Duroc：杜洛克；Seghers：斯格。

图3不同饲料对种公猪精子畸形率的影响。Landrace：长白；Yorkshire：大白；Duroc：杜洛克；Seghers：斯格。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1嗜酸乳杆菌CGMCC No.6499菌粉制备

1)嗜酸乳杆菌种子液的制备：将试管斜面保藏菌种接种至装有 20mL MRS培养基的厌氧管中，37℃恒温厌氧培养16-24h，待活菌数达107CFU/mL，按1％接种于装有100mL种子培养基的250mL锥形瓶中，37℃厌氧培养16-24h，待活菌数达107CFU/mL以上，作为种子液备用。

种子液MRS培养基为：蛋白胨，10.0g/L；牛肉膏，8.0g/L；酵母膏，4.0g/L；葡萄糖，20.0g/L；吐温80，1mL/L；磷酸氢二钾，2.0g/L；三水乙酸钠，5.0g/L；柠檬酸三铵，2.0g/L；七水硫酸镁，0.2g/L；硫酸锰，0.05g/L；蒸馏水加至1000mL，pH 6.2±0.2。

2)液体深层发酵培养

选用5L立式发酵罐进行液体发酵培养。其中，嗜酸乳杆菌种子液的接种量为1％，装液量65％，37℃厌氧培养20h后，测定每毫升菌液中的活菌数，待活菌数达108CFU/mL以上，放灌结束发酵培养。

发酵培养基组成如下：大豆蛋白胨50g，葡萄糖10g，酵母粉17g，低聚糖3g，蒸馏水加至1000mL，pH 6.0-6.5。

3)冻干菌粉制备

通过发酵液的离心、浓缩、加入冻干保护剂、真空冷冻干燥及菌粉活菌数检验等生产程序，最终制备出粉状活菌制剂。

取制备完的粉状活菌制剂1g，按国际GB/T 4789.35-2003方法测定每克菌粉中的活菌数，且菌粉中活菌数大于108CFU/g。

实施例2枯草芽孢杆菌DZS11的筛选

1、初筛

采集仔猪粪便样品10份，分别称取10g土样，加入90mL无菌水制成菌悬液，经过80℃水浴中处理20min，于180r/min振荡30min，梯度稀释至合适梯度，涂布于LB培养基上，培养获得86株疑似芽孢杆菌。

牛奶培养基(蛋白酶初筛用)：5g脱脂牛奶溶于50ml蒸馏水中；1.5g琼脂溶于50ml蒸馏水中，两液分别灭菌，待冷至45－50℃时， 将两液混匀倒平板，即成牛奶平板。将平板倒置过夜，使表面水分干燥，然后将菌种点接在平板上混合倒板，过夜待用。配制该培养基时，切勿将牛奶和琼脂混合灭菌，以防牛奶凝固。

淀粉水解平板(淀粉酶初筛用)：LB培养基，其中加入0.2％的可溶性淀粉，灭菌后倒平板。

生理盐水的配置方法是：0.85％的氯化钠，高压蒸汽灭菌后备用。

人工胃液的配置方法是：1％胃蛋白酶，0.85％的氯化钠，用盐酸调节pH到2.0，过滤除菌备用。

LB固体培养基制作方法是：蛋白胨10g，氯化钠10g，酵母膏5g，琼脂2％，pH7.0，高压蒸汽灭菌后备用。

LB液体培养基制作方法是：蛋白胨10g，氯化钠10g，酵母膏5g，pH7.0，高压蒸汽灭菌后备用。

人工胆盐的配置方法是：在LB液体培养基中添加0.3％的猪胆盐，高压蒸汽灭菌后备用。

2、复筛

(1)平板菌落计数法检测DZS11菌粉的活菌数约为1010CFU/g。

(2)菌株DZS11产淀粉酶能力测定

将通过初筛过程得到的目标菌株点接于淀粉水解平板，37℃培养24h，加入路哥氏碘液染色1min后观察透明圈直径与菌体直径比，初步测定淀粉酶活力。将淀粉酶较高菌株接种于发酵培养基37℃振荡培养24-48h，取2到3个时间点的发酵培养液离心取上清液检测淀粉酶和糖化酶活力，对菌株的淀粉酶活力进行复筛。

淀粉酶活力测定方法用GB/T 18932.16-2003进行测定。

经过初筛获得一株透明圈直径与菌体直径比最大的菌株，命名为DZS11。经过淀粉酶活力定量测定菌株DZS11的淀粉酶活力为3285.87U(淀粉酶在40℃下每ml菌液1h内水解1ml的1％淀粉，定义为1个淀粉酶活力单位)。

(3)菌株DZS11产蛋白酶能力测定

将通过初筛过程得到的目标菌株点接于牛奶平板，37℃培养24h，菌落周围出现透明圈，直接观察透明圈直径与菌体直径比，初步测定蛋白酶活力。将蛋白酶较高菌株接种于发酵培养基37℃振荡培养24-48h，取2到3个时间点的发酵培养液离心取上清液检测蛋白酶活力，对菌株的蛋白酶活力进行复筛。

蛋白酶活力测定方法用GB/T 28715-2012进行测定。

同时经过蛋白酶初筛比较发现，DZS11菌株的蛋白酶活力也比较高。经过蛋白酶活力定量测定菌株DZS11的中性蛋白酶活力为65.9U(蛋白酶在pH7.2时，40℃下每分钟水解酪蛋白产生lug酪氨酸，定义为1个蛋白酶活力单位)，酸性蛋白酶活力为41.6U(蛋白酶在pH3.0时，40℃下每分钟水解酪蛋白产生lug酪氨酸，定义为1个蛋白酶活力单位)。此菌株和实验室其他有效益生菌株及某些国内外产品分离菌株(国内3-1是从蔚蓝某产品分离得到的，国外K1是从科汉森某产品分离得到的)的产淀粉酶活力及产蛋白酶活力比较如下表1所示：

表1：部分实验室枯草芽孢杆菌菌株酶活测定

(4)人工胃液的耐受能力测定

将1g DZS11菌粉溶于9ml灭菌的生理盐水中，振荡混匀后，用 稀释涂布平板法计数。取上述菌液1ml加入9ml人工胃液中，37℃静置2小时，稀释涂布平板法计数，残存活菌浓度与原菌浓度之比为90.2％，从上述实验可以看出该菌能较好地在人工胃液中生存。

(5)人工胆盐的耐受能力测定

将1g DZS11菌粉溶于9ml灭菌的生理盐水中，振荡混匀后，用稀释涂布平板法计数。取上述菌液1ml加入9ml人工胆盐中，37℃静置2小时，稀释涂布平板法计数，残存活菌浓度与原菌浓度之比为91.6％，从上述实验可以看出该菌能较好地在人工胆盐中生存。

实施例3枯草芽孢杆菌DZS11菌粉制备

枯草芽孢杆菌DZS11的发酵：所用发酵培养基配制为：玉米粉0.5％、豆饼粉1％、蔗糖0.4％、鱼粉0.6％、碳酸钙0.1％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.2％、硫酸亚铁0.025％、硫酸锰0.025％。按比例配制成发酵液，然后调节pH到7.2。经121℃30min灭菌，降温至37℃，向其中接入菌龄为16h的种子液，接种量为3％，37℃，保持转速300rpm，通气比1:0.4，罐压0.05。培养至18h为发酵终点，放罐，得到枯草芽孢杆菌DZS11活菌数为6.21×109CFU/mL。

将发酵液中加入喷干保护剂(甘油0.8％，谷氨酸钠0.2％，玉米淀粉19％)，再经高温喷干得到枯草芽孢杆菌菌粉，活菌数约为45亿/g。

实施例4植物乳杆菌DZS12的筛选

1、初筛

采集仔猪粪便样品20份，分别称取10g粪便样品，加入90mL无菌水制成菌悬液，于180r/min振荡30min，梯度稀释至合适梯度，涂布于MRS培养基上，培养获得26株乳酸菌。

生理盐水的配置方法是：0.85％的氯化钠，高压蒸汽灭菌后备用。

人工胃液的配置方法是：1％胃蛋白酶，0.85％的氯化钠，用盐酸调节pH到2.0，过滤除菌备用。

MRS液体培养基的制作方法是：蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，葡萄糖20.0g，吐温801.0mL，乙酸钠5.0g，磷酸氢二钾2.0g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.25g，pH6.2～6.6，蒸馏水1000mL，高压蒸汽灭菌后备用。

MRS固体培养基的制作方法是：蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，葡萄糖20.0g，吐温801.0mL，乙酸钠5.0g，磷酸氢二钾2.0g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.25g，琼脂2％，pH6.2～6.6，蒸馏水1000mL，高压蒸汽灭菌后备用。

LB固体培养基制作方法是：蛋白胨10g，氯化钠10g，酵母膏5g，琼脂2％，pH7.0，蒸馏水1000mL，高压蒸汽灭菌后备用。

LB液体培养基制作方法是：蛋白胨10g，氯化钠10g，酵母膏5g，pH7.0，蒸馏水1000mL，高压蒸汽灭菌后备用。

人工胆盐的配置方法是：在MRS肉汤培养基中添加0.3％的猪胆盐，高压蒸汽灭菌后备用。

2、复筛

(1)平板菌落计数法检测菌粉的活菌数约为1011CFU/g。

(2)抑菌能力测定

指示菌：大肠杆菌K88、大肠杆菌K99和沙门氏菌，接种于LB液体培养液中，37℃，180rpm，培养15h；

制备乳酸菌菌液：初筛分离得到的乳酸菌，接种于MRS液体培养液中，37℃，静止培养48h；

体外抑菌试验：将培养48h的乳酸菌菌液离心，收集上清，取灭菌的96孔板，按1：1加入乳酸菌上清液和病原菌液，使混合液中的病原菌浓度为1×106CFU/mL，37℃，180rpm，培养6h；对照组为不添加等量MRS培养液的病原菌液，取出后用菌落计数法计算各种致病菌的活菌数计算混合液中的病原菌浓度，计算抑菌率。

抑菌率为1-(B1-B0)/(A1-A0)×100％

A为对照组混合液中的病原菌浓度，A0为0h数据，A1为6h数据；

B为乳酸菌上清液处理组混合液中的病原菌浓度，B0为0h数据，B1为6h数据；

经体外抑菌试验，筛选得到一株对大肠杆菌K88、大肠杆菌K99和沙门氏菌的生长都有显著抑制作用的乳酸菌，命名为DZS12。其抑菌综合效果最好，其对大肠杆菌K88的抑菌率达到85.34％；对大肠杆菌K99的抑菌率达到81.59％；同时对沙门氏菌的抑菌率达到75.56％。此菌株和实验室其他有效益生菌株及某些国内外产品分离菌株(国内是从蔚蓝某产品分离得到的，命名1-1，国外是从DSM某产品分离得到的，命名为DSM1)的抑菌能力比较如下表2所示：

表2：乳酸菌菌株抑菌能力测定

通过表2，可见其与国内外部分产品及实验室之前所筛选出的乳酸菌相比具有更加明显的抑菌作用，可以有效抑制畜禽常见病原菌的增值。

(3)人工胃液的耐受能力测定

将1g菌粉溶于9ml灭菌的生理盐水中，振荡混匀后，用稀释涂布平板法计数。取上述菌液1ml加入9ml人工胃液中，37℃静置2小时，稀释涂布平板法计数，残存活菌浓度与原菌浓度之比为97.6％，从上述实验可以看出该菌能较好地在人工胃液中生存。

(4)人工胆盐的耐受能力测定

将1g菌粉溶于9ml灭菌的生理盐水中，振荡混匀后，用稀释涂布平板法计数。取上述菌液1ml加入9ml人工胆盐中，37℃静置2小时，稀释涂布平板法计数，残存活菌浓度与原菌浓度之比为89.8％，从上述实验可以看出该菌能较好地在人工胆盐中生存。

实施例5植物乳杆菌DZS12的发酵

植物乳杆菌DZS12的发酵：所用发酵培养基是按重量百分比：蛋白胨1％，牛肉膏1％，酵母膏0.5％，柠檬酸氢二铵0.2％，葡萄糖2％g，吐温800.1％，乙酸钠0.5％，磷酸氢二钾0.2％，硫酸镁0.058％，硫酸锰0.025％配制的。按体积比为3％的接种量向发酵培养基中接入培养18h的所述植物乳杆菌的种子液，发酵过程中控制pH7.2，发酵温度37℃，转速300rpm，通气比1:0.4，罐压0.05MPa。培养至18h为发酵终点，放罐，得到植物乳杆菌DZS12活菌数为4.5×109CFU/mL。

所得发酵液经离心得到菌体后，按菌体：保护剂溶液＝1:10加入保护剂溶液(20％的脱脂奶粉、5％的蔗糖、1％的维生素C、1％谷氨酸钠)，充分混匀。将上述混匀后的菌液置于冷冻干燥机中进行冻干，得到冻干后的菌粉，活菌数约为2×1011CFU/g。

实施例6微生态制备

将三种已经制备好的菌粉和玉米芯粉按重量配比为1:1:1:20进行复配，得到复合微生态制剂，镜检复配后的微生态制剂成品活菌总数大于108CFU/g。

实施例7

玉米500份，豆粕150份，鱼粉55份，小麦胚芽40份，膨化大豆40份，磷酸氢钙15份，石粉8份，食盐8份，50％氯化胆碱2份，微生态制剂0.3份，赖氨酸1份，蛋氨酸0.5份、苏氨酸0.5-1 份、公猪预混料1份。

其中，公猪预混料每公斤含有:维生素A 3500Iu，维生素D 4500Iu，维生素E 20Iu，铜4毫克，铁250毫克，锌40毫克，锰80毫克，肉碱0.8克，欧米伽3鱼油15克，酵母硒0.1克，中链脂肪酸MCT 2克。

实施例8

玉米700份，豆粕200份，鱼粉30份，小麦胚芽60份，膨化大豆20份，磷酸氢钙10份，石粉15份，食盐2份，50％氯化胆碱1份，微生态制剂0.1份，赖氨酸0.5份，蛋氨酸0.2-0.5份、苏氨酸0.5-1份、公猪预混料0.5份。

所述公猪预混料每公斤含有:维生素A 12000Iu，维生素D 4500Iu，维生素E100Iu，铜35毫克，铁50毫克，锌150毫克，锰16-毫克，肉碱0.2克，欧米伽3鱼油5克，酵母硒0.3克，中链脂肪酸MCT 0.5克。

实施例9

玉米650份、豆粕180份、鱼粉50份、小麦胚芽50份、膨化大豆30份、磷酸氢钙14份、石粉10份、食盐5份、50％氯化胆碱1.5份、微生态制剂0.2份、公猪预混料0.8份。

公猪预混料每公斤含量:维生素A 3500-12000IU，维生素D750-4500IU，维生素E20-100IU，铜4-35毫克，铁50-250毫克，锌40-150毫克，锰16-80毫克。肉碱0.4克，欧米伽3鱼油10克，酵母硒0.15克，中链脂肪酸MCT 1克。

试验例1

1.1试验时间与地点

2015.3～2015.6在宝鸡市陈仓区鑫鑫良种猪繁育场陈仓区种公猪站进行。

1.2试验动物

本试验选用种公猪站4个品种(大白、约克、杜洛克、斯格配套系)共计24头成年种公猪(26～32月龄)。每个品种6头，完全随机抽取3头作为对照组，剩余3头作为试验组。

1.3试验设计

试验采用双因素交叉试验，参与试验公猪饲养在同一猪舍，猪舍环境控制完全相同。对照组种公猪饲喂直接购买的商品公猪料，试验组饲喂实施例9制备的公猪料。

采用每天饲喂2次，每次1.5kg，自由饮水的方式进行饲喂。试验开始后30天为过渡期，然后为正试期(60天)，过渡期与正试期间均正常采精，每隔3天采精一次。

1.3试验方法

1.3.1精液采集

手握法收集公猪精液，严格按照国家标准(GB/T 25172-2010)进行。

1.3.2精液密度

采用丹麦ChemMetec公司生产的NucleoCounter SP-100精子密度仪测定原精液的精子密度，每一份精液测定三次，然后计算平均值。

1.3.3精液体积和总精子数

用电子分析天平称取精液质量作为精液总体积，以ml为单位；总精子数(亿)＝精液密度(亿/ml)×精液量(ml)。

1.3.4精子畸形率的计算

采用Giemsa染色进行计算。吸取30μl的原精液滴均匀涂抹在载玻片上，自然晾干；然后用95％酒精固定30min，自然晾干；再用Giemsa溶液染色2h，冲洗干净并自然晾干。然后在显微镜(400X)下观察精子畸形精子数目，计数200个精子，同时记录畸形精子数，计算畸形精子占总精子数的百分率。

1.4数据处理分析采用spss20.0对实验数据进行处理，采用one-way ANOVA进行方差分析与显著性检验。

2结果与分析

2.1不同饲料对公猪精子密度的影响

饲料对公猪精子密度的影响如图1所示。由下图可知，与对照组相比，试验组长白、杜洛克公猪的精子密度差异不显著；而试验组大白、斯格种公猪的精子密度显著高于对照组(p<0.05)；各品种间公猪的精子密度差异不显著。

2.2不同饲料对公猪总精子数的影响

饲料对公猪精液中总精子数的影响如图2所示。结果表明，用试验组饲料饲喂的公猪总精子数均高于对照组，以试验组长白种公猪的总精子数差异最明显(p>0.05)。

2.3不同饲料对公猪精子畸形率的影响

不同饲料对公猪精子畸形率的影响如图3所示。从图3可知，与对照组相比，饲喂试验组饲料的大白、杜洛克、斯格公猪的精子畸形率均显著降低(p<0.05)。

3结论

种公猪精液品质的好坏是衡量其繁殖性能最重要的指标。而饲料中的营养因素是影响种公猪精液品质的重要因素。

研究表明，有机硒能使精子活力增强。在本实验中促进了大白和斯格公猪在精液密度的显著上升(图2)，表明有机硒对公猪精子的生成有促进作用。

VE、肉碱、鱼油能影响其生殖器官的生长发育与精子的生成，从而影响精液品质。研究表明，公猪VE、欧米伽3，缺乏时精子数减少，畸形精子增多。适当补充VE、欧米伽3，肉碱能改善公猪繁殖性能，有助于精子的成熟和精液质量的提高。本试验中，大白与斯格公猪的公猪精液密度差异显著(p<0.05)，表明试验组饲料添加的 VE和鱼油、肉碱对提高约克、斯格公猪精液密度和总精子数有非常好的效果(图1,2)。在本试验中，不同饲料对公猪精液的畸形率有极大的差异(图3)，表明试验组公猪料能够显著降低大白、杜洛克、斯格3个品种的精子畸形率。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。